Validazione della reattività immunoistochimica di un pannello anticorpale in diverse specie ittiche mediante l’impiego di “tissue arrays”

Ad oggi esistono pochi studi mirati alla caratterizzazione immunofenotipica di componenti cellulari e tissutali nelle specie ittiche, anche a causa della scarsa disponibilità di specifici anticorpi e di informazioni sulla cross-reattività dei markers Immunoistochimici (IIC) diretti verso antigeni di mammiferi. La ricerca ha previsto l’applicazione di un pannello anticorpale in tessuti di diverse specie ittiche al fine di valutare la cross-reattività di anticorpi commerciali usati nel nostro laboratorio, ricorrendo all’allestimento di tissue arrays per ottimizzare tempi di lavorazione e quantità di reagenti impiegati. Sono stati campionati esemplari appartenenti a 12 differenti specie ittiche di interesse commerciale da cui sono stati prelevati cute/muscolo, branchie, fegato/pancreas, rene, milza, gonadi, poi fissati in formalina tamponata al 10% e inclusi in paraffina. Sono stati costruiti arrays per ciascun tessuto dai quali sono state poi tagliate sezioni seriate di 4 μm sottoposte a colorazione IIC. Sono stati testati anticorpi diretti contro marcatori epiteliali (CKAE1/AE3, CK5/6, CK14, CK19, caderina E), mesenchimali (vimentina, desmina, α-actina-sm, fattore VIII-RA), emopoietici (CD3, CD18, CD45, CD79α, CD117, MAC387), del tessuto nervoso (proteina S100), endocrini (cromogranina A, sinaptofisina) e antigeni del ciclo cellulare (Ki67, telomerasi-hTERT). Dei 21 anticorpi testati 7 sono risultati immunoreattivi (CK AE1/AE3, CK5/6, Caderina-E, vimentina, CD117, sinaptofisina e hTERT), con una reattività coerente con quella attesa e omogenea nelle specie testate. La metodica IIC, quando opportunamente validata, può essere pertanto utile per identificare e tipizzare componenti tissutali e cellulari anche negli organismi acquatici